免疫組化染色

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免疫組化染色范文第1篇

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞學(xué)；薄層液基涂片；染色；方法

【Abstract】objective:tostudythin-layerliquid-basedcytologysmeartechniqueanditsapplicationinImmunohistochemistry.Method:theuseofcomparativesignificanceoftwogroupsofcases.Therewere74casesofadenocarcinomainpleuralfluid-basedsmear.40casesofsmallcell,resolvingphlegmandsmear.Secondgenerationusingimmunohistochemicaltwo-stepdye.Results:adenocarcinomainpleuraleffusionandascitesinathinlayerofliquidbasedsmearsadenocarcinomacellsonCEAantibody-negative,Mesothelialcellstomesothelin(mesothelin)antibody-positivesmallsmallcellundifferentiatedcarcinomacellandresolvingphlegmsmearonCHAantibody-positive.OnLCAantibody-positivelymphocytes.Conclusion:ImmunohistochemicalAntigen-antibodyreactionisahighdegreeofspecificityandsensitivityofbiochemicalreactions,toaspecificantigenrecognitionandstrong.Incells,subcellularleveldetectionAntigenmoleculeisdifficultforotherbiotechnologyandalternative.Onthecytologyhasbroadapplicationprospects.

【Keywords】Cytology;thinlayerliquidbasedsmears;dyeing;method.

【中圖分類號】R156.3【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1005-0515(2011)12-0308-02

免疫組化是用特異性抗體對細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位或定量檢測。凡能作為抗原半抗原的物質(zhì)，都可用免疫組化方法檢測，近年免疫組化技術(shù)在病理組織學(xué)上廣泛應(yīng)用，但少見于細(xì)胞學(xué)薄層液基涂片的報道。本文總結(jié)細(xì)胞學(xué)薄層液基涂片的免疫組化染色實驗，探討免疫組化技術(shù)在細(xì)胞學(xué)上的應(yīng)用。

1材料與方法

1.1材料：選用有對比意義的細(xì)胞學(xué)檢材，記有腺癌性胸腹水薄層液基涂片74例，小細(xì)胞未分化癌涂片40例，試劑選用邁新公司Elivsionplus免疫組化試劑盒。

1.2方法：免疫組化二代二步染色法：1）胸腹水、痰薄層液基涂片、固定、潮干、PBS液洗滌。2）胰酶消化修復(fù)抗原，膠酶濃縮劑與稀釋液按1:3滴加，37℃孵育15分鐘，PBS液洗滌。3）阻斷：滴加3%過氧化氫液，37℃孵育15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS液洗滌。4）免疫反應(yīng)，抗體依需要自選，滴加后37℃孵育1小時，PBS液洗滌。5增強(qiáng)反應(yīng)，滴加增強(qiáng)劑，37℃孵育30分鐘，PBS液洗滌.6）標(biāo)記：滴加酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，37℃孵育30分鐘，PBS液洗滌。7）顯色，滴加新制DAB液，鏡下觀察，顯色適當(dāng)后放入蒸餾水中終止反應(yīng)。8）蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固。

2結(jié)果

經(jīng)反復(fù)實驗總結(jié)出以上染色方法，可使陽性細(xì)胞液基涂片中的陽性細(xì)胞呈黃棕色或棕褐色。74例腺癌性胸腹水離心涂片中，變形未圓形、卵圓形，聚集成團(tuán)的深染的腺癌細(xì)胞，與增生間皮細(xì)胞在鏡下難以區(qū)別；通過免疫組化染色，腺癌細(xì)胞對CEA抗體顯陽性，間皮細(xì)胞對mesothelin（間皮素）抗體顯陰性。40例小細(xì)胞未分化癌痰涂片中，小細(xì)胞未分化癌細(xì)胞略大于淋巴細(xì)胞，圓形、卵形、短小梭形，核深染，與大淋巴細(xì)胞難以鑒別。通過免疫組化染色，小細(xì)胞未分化癌細(xì)胞對CHA抗體顯陽性，淋巴細(xì)胞對LCA抗體顯陰性，這樣可以鑒別開來。

免疫組化染色范文第2篇

在惡性淋巴瘤的診斷與分型中,免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記作為輔助診斷的手段越來越重要,甚至已經(jīng)成為不可缺少的方法之一。目前,在臨床病理診斷中使用免疫組化方法主要是在石蠟包埋組織中進(jìn)行。在組織固定、包埋等處理過程中很多抗原被封閉。部分抗原需要按照抗體使用指南中的方法來做抗原暴露修復(fù),組織中的部分抗原仍然不能完全暴露,由此造成假陰性,從而影響正確診斷。筆者在臨床應(yīng)用免疫組化技術(shù)過程中,體會到將部分組織切片采用抗原雙次修復(fù)的辦法[1],讓僅一次抗原修復(fù),封閉抗原未能充分暴露的組織能夠得到有效的表達(dá)。降低了假陰性和假弱陽性,提高了淋巴瘤診斷與分型的準(zhǔn)確率。

1 資料與方法

1.1 一般資料 挑選中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院病理科 2007~2009年淋巴瘤病例37例,其中最終診斷為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的共有23例,套細(xì)胞淋巴瘤的共有9例,結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤,鼻型的共有5例,性別:男20例,女17例,年齡35~72歲。將石蠟組織標(biāo)本切片后分2組 A組:熱修復(fù)組;B組:熱修復(fù)聯(lián)合胰酶修復(fù)組。

UItraSenSitire Tm S P免疫組化試劑盒(A:內(nèi)源性過氧化酶阻斷劑;B:動物非疫血清;C:生物素標(biāo)記的二抗;D:鏈霉菌抗生物素蛋白 過氧化酶)。Trypsin 胰蛋白酶修復(fù)液 、PBS沖洗液pH7.4。0.01%檸檬酸中性緩沖修復(fù)液、日本產(chǎn)家用微波滬、DAB顯色劑。鼠抗人單抗CD3、鼠抗人單抗CD45RO、鼠抗人單抗CD20、鼠抗人單抗CD79a、鼠抗人單抗CyclinD1、鼠抗人單抗CD5、鼠抗人單抗CD56。(以上試劑均購自福建邁新試劑公司)

1.2 方法 ①組織常規(guī)固定脫水石蠟包埋切片脫蠟至蒸餾水沖洗 PBS沖洗3 min×3次;

②滴加內(nèi)源性過氧化酶阻斷劑15 minPBS沖洗3 min×3次;

③A組:切片放入檸檬酸修復(fù)液盒中置微波滬里修復(fù)。100℃微波1~2 min、40℃微波3 min修復(fù),取出修復(fù)盒、室溫下自然冷卻。PBS沖洗3 min×3次;

B組:切片在A組修復(fù)的基礎(chǔ)上進(jìn)行第二次修復(fù):滴加0.1%胰酶修復(fù)液15 min,PBS沖洗3 min×3次;

④甩去PBS沖洗液,切片同時分別滴加血清15 min;

⑤甩去血清,滴加相應(yīng)抗體,濕盒置37℃溫箱中,孵育2~3 h,取出室溫下PBS沖洗3 min×3次;

⑥滴加生物素標(biāo)記二抗,15 min,PBS 3 min×3次;

⑦滴加鏈霉菌抗生物素蛋白 過氧化酶15 min,PBS沖洗3 min×3次;

⑧滴加DAB顯色劑,顯色(約5 min)后將切片用水沖洗、蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片。

2 結(jié)果

光鏡下觀察兩組中每一例淋巴瘤的腫瘤細(xì)胞胞漿及胞膜,以大于10%的腫瘤細(xì)胞胞漿或胞膜出現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽性標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果如下:

①23例彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤組中,CD20用A方法修復(fù)的陽性率為34.78%,B方法修復(fù)的陽性率為100%;CD79a用A方法修復(fù)的陽性率為30.43%,B方法修復(fù)的陽性率為91.30%;CD3及CD45RO為T細(xì)胞標(biāo)記,腫瘤細(xì)胞不表達(dá)。

表1

CD20及CD79a在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的

陽性表達(dá)率

分組A方法B方法

CD208/23(34.78%)23/23(100%)

CD79a7/23(30.43%)21/23(91.30%)

注:P值

②9例套區(qū)淋巴瘤組中,CD5用A方法修復(fù)的陽性率為33.33%,B方法修復(fù)的陽性率為88.89%;CyclinD1用A方法修復(fù)的陽性率為22.22%,B方法修復(fù)的陽性率為88.89%;CD3及CD45RO為T細(xì)胞標(biāo)記,腫瘤細(xì)胞不表達(dá)。

表2

CD5及CyclinD1在套區(qū)淋巴瘤中的陽性表達(dá)率

分組A方法B方法

CD5*3/9(33.33%)8/9(88.89%)

CyclinD1**2/9(22.22%)8/9(88.89%)

注:*p值

以上結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析均有統(tǒng)計學(xué)意義,說明在B細(xì)胞淋巴瘤中彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤及套區(qū)淋巴瘤的診斷免疫組織化學(xué)染色中,使用雙次抗原修復(fù)法修復(fù)CD20、CD79a及CD5、CyclinD1的陽性率顯著高于一次抗原修復(fù)法,同時做T細(xì)胞標(biāo)記,兩種修復(fù)方法均不易產(chǎn)生假陽性。

筆者還對本科室的5例結(jié)外NK、T細(xì)胞淋巴瘤,鼻型病例進(jìn)行同樣比對,發(fā)現(xiàn)CD56用A方法修復(fù)的陽性率為60%,B方法修復(fù)的陽性率為100%;由于CD45RO在NK/T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)不穩(wěn)定,所以用方法修復(fù)對比沒有差異性;CD20及CD79a為B細(xì)胞標(biāo)記,腫瘤細(xì)胞不表達(dá)。由于樣本數(shù)小,不適宜做統(tǒng)計學(xué)分析,陳列在此僅供參考!

3 討論

惡性淋巴瘤的病理診斷與鑒別診斷是臨床病理診斷中最困難的領(lǐng)域,隨著免疫學(xué)的發(fā)展,免疫組織化學(xué)技術(shù)不僅在診斷方面提供了有力的依據(jù),而且在具體分型及指導(dǎo)用藥方面也起著重要作用。但由于淋巴結(jié)本身的結(jié)構(gòu)特點及在石蠟標(biāo)本制作過程中,組織中的一些抗原容易被封閉,導(dǎo)致免疫標(biāo)記表達(dá)不理想或陰性表達(dá),從而混淆診斷醫(yī)師的思路,延長診斷時間,甚至誤診!筆者在學(xué)習(xí)了免疫組化染色中抗原雙重暴露法后[1],應(yīng)用于惡性淋巴瘤的診斷。

長期臨床工作中,筆者發(fā)現(xiàn)修復(fù)的時間與方法不到位時,組織中抗原無法完全暴露。常規(guī)應(yīng)用高溫微波修復(fù),設(shè)定溫度100℃修復(fù)10~15 min,組織中部分抗原能夠暴露,但薄切的組織切片會破碎、脫落,影響觀察診斷。經(jīng)反復(fù)、設(shè)定多個修復(fù)時間段實驗(15、10、5、3、1 min),發(fā)現(xiàn)高溫100℃修復(fù)1~2 min,組織切片形態(tài)完整,此時繼續(xù)再用40℃溫度,保持3 min修復(fù),組織中抗原能達(dá)到一定限度的暴露。部分淋巴瘤腫瘤標(biāo)記表達(dá)較困難,我們用(溫度100℃時間1~2 min;溫度40℃時間3 min)在微波爐中進(jìn)行熱修復(fù)后,再用0.1%胰酶修復(fù)15 min。通過兩次修復(fù)后,組織中抗原與抗體結(jié)合點位增多,免疫標(biāo)記敏感性進(jìn)一步加強(qiáng),組織中抗原充分暴露。同時又沒有破壞免疫標(biāo)記的準(zhǔn)確性和特異性。組織染色后,假陰性表達(dá)減少,為醫(yī)生提供了準(zhǔn)確的輔助診斷信息,確保淋巴瘤診斷與分型的準(zhǔn)確性。

免疫組化染色范文第3篇

 

關(guān)鍵詞： 胸腔積液;冰凍切片;免疫組化

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2006年5月—2008年12月我們共收集胸水標(biāo)本64例，其中男性28例、女性36例，年齡32～82歲，平均年齡51.6歲。經(jīng)組織學(xué)或結(jié)合臨床資料證實腺癌12例，鱗癌8例，惡性上皮型間皮瘤4例，間皮增生40例。

1.2 方法 ①將送檢的胸水直接用一次性吸管吸取下面沉淀的部分30 ml于試管內(nèi)，2 500 r/min，離心10 min。將上清液去掉，離心沉淀物涂片1張、HE染色。沉淀的部分放在冰凍切片機(jī)上冷凍頭上，然后加入OCT包埋劑進(jìn)行切片。②胸水離心沉淀物少就直接倒去上清液，先在冰凍切片機(jī)的冷凍頭上加入OCT包埋劑，然后將胸水離心沉淀物放在上面進(jìn)行切片。③胸水離心沉淀物常規(guī)切片6張：1張HE染色，5張免疫組化染色。④制作免疫組化染色的冷凍切片必須冷藏保存，然后根據(jù)需要進(jìn)行免疫組化染色。⑤免疫組化染色標(biāo)記細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK)、上皮膜抗原(EMA)、肺癌相關(guān)抗原(LCA)、間皮細(xì)胞、波形蛋白(vimentin)。免疫組化染色方法：采用即用型快捷免疫組化MaxvislonTM試劑盒，試劑及抗體和免疫組化陽性片均由福建邁新生物技術(shù)公司提供，陰性對照采用PBS作為一抗。

染色步驟：①切片室溫干燥后，入4℃丙酮固定10 min，用PBS(pH7.4)沖洗3次，每次3 min。②根據(jù)每一種抗體的要求，對組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)，除細(xì)胞角蛋白用胰酶消化外，間皮細(xì)胞、vimentin、LCA、EMA都要檸檬酸高溫修復(fù)(按說明操作)。 ③每張切片加1滴3%過氧化氫，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3次，每次3 min。 ④每張切片加1滴自選1抗體，室溫下孵育60 min。⑤PBS沖洗3次，每次3 min。⑥除去PBS液，每張切片加2滴新配制的DAB溶液10 min。⑦自來水洗，蘇木素復(fù)染直至中性樹膠封固。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.01，P<0.01認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。所有統(tǒng)計均由SPSS 10.0軟件完成。

2 結(jié)果

送檢的64例胸水直接離心涂片HE染色診斷陽性細(xì)胞7例，陰性39例，可疑18例。應(yīng)用冰凍切片技術(shù)聯(lián)合免疫組化檢查結(jié)果陽性細(xì)胞24例，陰性38例，可疑陽性僅2例;χ2=22.13，P<0.01，見表1。冰凍切片免疫組化標(biāo)記結(jié)果見表2。表1 64例胸水單純涂片與冰凍切片診斷結(jié)果表2 冰凍切片免疫組化標(biāo)記結(jié)果

3 討論

胸腔積液是多種胸部疾病特別是惡性腫瘤的常見伴發(fā)體征，甚至為患者首發(fā)癥狀。通過胸腔積液對明確病變性質(zhì)及類型有重要意義，對疾病的治療也有重要指導(dǎo)意義。一般的胸水病理檢查僅僅行單純離心、涂片、HE染色，光鏡下觀察，但由于細(xì)胞分散、染色效果不理想，又因細(xì)胞容易堆積成團(tuán)，其診斷的陽性率較低，特別是小細(xì)胞腫瘤難以和間皮瘤、淋巴瘤、未分化腫瘤細(xì)胞區(qū)別。

免疫組化染色范文第4篇

【摘要】：本文對免疫組化的優(yōu)點作了簡要介紹，同時介紹了其在病理診斷中的應(yīng)用，有支持、鑒別診斷的作用，檢測激素受體與生長因子，對預(yù)后及治療產(chǎn)生重要意義。文中還敘說了免疫組化的結(jié)果對腫瘤細(xì)胞增生和分期具有評價作用，并對免疫組化應(yīng)該注意的事項也逐一列舉。

當(dāng)免疫學(xué)的理論和技術(shù)進(jìn)一步成熟發(fā)展后，就產(chǎn)生了免疫組織化學(xué)技術(shù)，將這一方法應(yīng)用在病理診斷上就稱為診斷免疫組織化學(xué)。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和臨床研究中免疫組織化學(xué)對疾病尤其是對腫瘤的診斷、鑒別診斷及發(fā)病機(jī)制的研究提供了強(qiáng)有力的手段。

（一） 免疫組化的優(yōu)點

（1） 特異性強(qiáng)

免疫組化是利用抗原、抗體可以特異性結(jié)合，也就是“一對一”的結(jié)合的原理。

（2） 敏感性高

現(xiàn)在免疫組化的ABC法、SP法的問世，抗體可以稀釋成千上萬倍甚至上億倍，仍可發(fā)生抗原抗體的結(jié)合。

（3） 定位精確

免疫組化的反應(yīng)可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行，抗原實現(xiàn)了準(zhǔn)確的定位觀察，對于病理學(xué)的診斷和研究具有非常重要的意義。

（二） 免疫組織化學(xué)的應(yīng)用

（1） 免疫組化對病理診斷具有支持和鑒別診斷的作用。

在病理診斷比較明確的情況下，應(yīng)用組化標(biāo)記可以起到支持診斷的作用。有時無法判斷腫瘤來源時，組化的應(yīng)用將起到極大的幫助，可以鑒別腫瘤的來源和性質(zhì)。

（2） 激素受體與生長因子的檢測對預(yù)后及治療具有十分重要的意義

激素受體的檢測對于乳腺癌的研究已有了較明確的結(jié)論，雌激素受體陽性的乳腺癌患者預(yù)后優(yōu)于陰性表達(dá)者，同時陽性表達(dá)者對內(nèi)分泌治療效果好，患者生存期延長。

（3） 組化結(jié)果對腫瘤細(xì)胞增生的判斷和評價。

反應(yīng)增生程度的指標(biāo)有Ki67、PCNA，其陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)多者，其腫瘤惡性程度高，預(yù)后不良。

（4） 免疫組化對腫瘤分期具有意義

在判斷腫瘤是原位還是浸潤生長方面具有重要意義，能為臨床治療提供依據(jù)。如采用層粘連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可以清楚地顯示基底膜的主要成分，如果證實腫瘤突破了基底膜，那就是浸潤性腫瘤而不是原位癌了，其預(yù)后是不同的。

（5） 對腫瘤的治療具有指導(dǎo)作用。

很多腫瘤對化療不敏感，由于瘤細(xì)胞內(nèi)的多藥耐藥基因編碼的酶活性增加所導(dǎo)致，用免疫組化的方法可以檢查細(xì)胞內(nèi)的這些酶或糖蛋白來研究腫瘤是否具有抗藥性，比如檢測P-糖蛋白、MRP、LRP、TOPOⅡa、GST、TS等。

（三） 免疫組化結(jié)果的注意事項

（1） 必須設(shè)立陽性和陰性對照

每批染色都要有已知的陽性和陰性對照，這樣才能保證結(jié)果的可靠性，沒有對照的陽性和陰性結(jié)果是不可信的。

（2） 非特異性染色的干擾

非特異性染色屬于假陽性又稱背景染色，它的存在干擾結(jié)果的判斷，因此在染色過程中要減少背景著色。

（3） 抗原的聯(lián)合標(biāo)記

免疫組化染色范文第5篇

【摘要】近年來分子生物學(xué)技術(shù)以及其它高、新技術(shù)在病理領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，同樣作為體育界的基礎(chǔ)研究學(xué)科運動人體科學(xué)的發(fā)展已經(jīng)不能滿足簡單的宏觀的研究，越來越多的醫(yī)學(xué)檢驗以及病理學(xué)實驗技術(shù)在運動人體科學(xué)廣泛應(yīng)用，尤其是組織病理學(xué)技術(shù)中定位技術(shù)，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學(xué)常用的定位技術(shù)的方法進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】組織病理學(xué)；技術(shù)；運動人體科學(xué)

【中圖分類號】 R818.02【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1005-1074(2009)04-0045-01

1免疫組織化學(xué)實驗技術(shù)

隨著免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的廣泛應(yīng)用，病理學(xué)研究產(chǎn)生了劃時代的飛躍。免疫組織化學(xué)是病理學(xué)實驗中常用的方法，是在蛋白質(zhì)水平用各種特異性抗體檢測細(xì)胞內(nèi)各種抗原物質(zhì)。根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫組織化學(xué)技術(shù)可分為免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫金-銀細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫電子顯微鏡技術(shù)等。

1.1免疫組織化學(xué)實驗步驟免疫組化技術(shù)是在組織化學(xué)的方法上結(jié)合免疫學(xué)的理論和技術(shù)發(fā)展起來的一門新技術(shù)。其原理是利用免疫學(xué)的核心――抗原體特異性結(jié)合的原理，用標(biāo)記抗體追蹤抗原，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對其顏色進(jìn)行觀察，以達(dá)到檢測抗原物的目的[1]。

1.2免疫組化技術(shù)的優(yōu)點免疫組化技術(shù)的優(yōu)點：①特異性強(qiáng)，免疫組化中抗體與組織細(xì)胞中的抗原的結(jié)合是特異的。如白細(xì)胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細(xì)胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素―生物素（ABC）法和鏈酶素―過氧化物酶連接（SP）法的出現(xiàn)，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達(dá)到了上千、上萬，甚至上億倍，使免疫組化技術(shù)更加可靠。③定位準(zhǔn)確，由于抗原抗體的結(jié)合是特異的，因而免疫組化技術(shù)可在組織和細(xì)胞內(nèi)準(zhǔn)確定位，對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，將形態(tài)與功能相結(jié)合，對疾病進(jìn)行深入的研究。

2原位雜交實驗技術(shù)

原位雜交是將組織化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合來檢測合定位核酸的技術(shù)。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來檢測細(xì)胞內(nèi)是否存在欲檢測物質(zhì)的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個層次的檢驗方法。根據(jù)所選探針和待測靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。

2.1原位雜交技術(shù)的應(yīng)用原位雜交由于不需要從待測組織中提取核酸，可完好的保存組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)與基因功能活動的變化相結(jié)合進(jìn)行多層面的研究。主要應(yīng)用：①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位可用于基因圖譜、基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的監(jiān)測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化；⑥間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究。

2.2原位雜交技術(shù)與免疫組化的比較

2.2.1兩者的區(qū)別原位雜交與免疫組化染色技術(shù)相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測對象是抗原，機(jī)制是抗原-抗體的特異性結(jié)合，是蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補配對的原則與待測靶序列結(jié)合，是DNA或mRNA水平的檢測。從實驗方法來看，免疫組化染色操作相對簡單，成本相對較低，受外界因素的影響相對小；原位雜交技術(shù)無論從實驗設(shè)計上，還是從實際操作上均較免疫組化染色復(fù)雜，成本的高低與試劑的種類和來源密切相關(guān)。一般而言，直接選用商品化的標(biāo)記探測和檢測試劑盒的實驗成本較高；熒光標(biāo)記探針較非熒光標(biāo)記探針的成本高，對樣本及實驗條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。

2.2.2免疫組化與原位雜交雙標(biāo)技術(shù)雙標(biāo)技術(shù)是在同一張組織切片上標(biāo)記兩種不同的抗體或同時應(yīng)用兩種不同的檢測手段，如免疫組化和原位雜交技術(shù)，在不同層次來檢測同一細(xì)胞上某些物質(zhì)的表達(dá)是否有相關(guān)性的一種實驗方法。與傳統(tǒng)的單項檢測相比，雙標(biāo)記具有無可比擬的優(yōu)越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時間或空間的樣本誤差。實驗方法上先進(jìn)行原位雜交會減少免疫組化過程中對待測DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進(jìn)行原位雜交后進(jìn)行免疫組化標(biāo)記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問題就是：①所用的實驗設(shè)備必須經(jīng)DEPC水浸泡或200℃烤箱過夜，操作時須帶口罩及手套；②當(dāng)雜交步驟完成后，切片必須認(rèn)真浸泡及長時間洗滌至少超過30min。③作免疫組化的各步驟時間均須適當(dāng)延長，以增加抗原抗體間的結(jié)合，楊青春等人研究發(fā)現(xiàn)每個步驟均延長2～3倍時間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復(fù)染，以免遮蓋核信號。

參考文獻(xiàn)

[1]紀(jì)小龍，施作霖.診斷免疫組織化學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997.5.

[2]許良中.實用腫瘤病理方法學(xué)[M].上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997:222-223