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【關鍵詞】 乙型肝炎病毒;核酸;血液篩查
核酸檢測(NAT)屬于新型血液病毒篩查檢測方法, 能夠直接檢測到血液中病原體的核酸[1]。核酸檢測在篩查獻血者乙型肝炎中具有重要作用, 本文選取無償獻血標本92432份進行分析, 現報告如下。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 選取本院2009年1月~2012年12月無償獻血標本92432份, 其中應用核酸檢測標本34440份。確保采集血液標本后每個獻血者均及時留取4管標本;在對酶免4項、ALT予以檢測時可選用分離膠促凝真空采血管;核酸測定時則選擇帶分離膠EDTA-K2抗凝真空采血管;對血型進行測定時選取EDTA-K2抗凝真空采血管, 將具體的采集日期、樣品編碼等基礎信息進行準確記錄。得到的標本需標準均在2 h內進行離心處理存至2~8℃冰箱內。2~3 h內送至檢測中心離心保存, 24 h內血清學篩查并實施NAT檢測。
1. 2 方法 ELISA檢測:所得到的每份獻血標本在完成HBsAg檢測過程中均需予以2種ELISA試劑, 每批實驗需具有室內質控品組、空白對照組、陰性對照組和陽性對照組。對結果進行判斷的標準為:S/CO≥1屬于陽性(此狀態的血液檢測結果不符合標準), 0.5
核酸檢測:以混樣方法對核酸予以檢測。每級混樣池均有6個標本, 且均設定內對照。將混合所測定陰性定作陰性, 將混合測定呈現陽性者予以拆分檢測, 當拆分檢測呈現陰性時屬于NAT陰性, 當拆分測定呈現陽性時則屬于NAT陽性。
在所有核酸篩查時, 當標本呈現陽性時, 核酸為陽性但經“二對半”測定屬陰性, 且核酸出現陰性獻血者予以追蹤隨訪, 持續2個月后重新采樣, 分別予以HBV-DNA和“兩對半”檢測。
2 結果
在本文所選取的92432份血液標本中, 進行血清學測定, 標本屬于HBsAg陰性者有92082份, 標本屬于單試劑陽性者有30份, 標本屬于雙試劑陽性者有320份。
予以核酸測定標本共有34440份, 其中包括34430標本予以HBsAg酶免檢測呈現陰性, 10份標本予以單試劑測定呈現陽性。在34440份標本中, 核酸篩查呈現陽性者52份, 通過核酸測定呈現陽性者38份, HBsAg測定呈現陽性者2份, 如表1所示, 陽性檢出率與陽性確認率有15.1/萬(52/34440)、11.6/萬(40/34440)。在所認定的呈現陽性40份標本內, 只有10份標本經HBsAg測定呈現單陽, 予以核酸篩查呈現陽性, 對HBVELISA漏檢率進行計算得到8.7/萬(30/34440)。另14份標本通過核酸篩查發現其均呈現陽性, 經HBsAg篩查及乙肝“兩對半”測定屬于陰性。
核酸篩查呈現陽性的52份標本, 將其中符合條件的26份實施追蹤檢測, 其中12份通過核酸篩查顯示屬于陽性, 經乙肝“兩對半”測定則呈現陰性, 14份標本經核酸檢測呈現陰性。經追蹤檢測發現, 12份乙肝“兩對半”起始檢測呈現陰性標本, 經隨訪HBV-DNA(+)、HBsAg(+)8例, NAT對HBV酶免窗口期標本檢出率2.32/萬(8/34440), 隨訪HBsAg(-)4例, 為隱匿性HBV感染(OBI);14份核酸測定屬于陰性, 隨訪過程中發現6例病毒載量低于20 IU/ml, 4例 HBsAg一直呈現陰性, 屬于OBI。經計算發現8例OBI, NAT對OBI檢出率2.32/萬(8/34440)。
3 討論
輸血是否具有安全性主要風險在于被篩查病毒所處在的“窗口期”。有研究資料發現, 經NAT檢測, 能夠減少HBV、HCV、HIV的EIA“窗口期”, 減少率達到40%~75%, 使得病毒經輸血傳播風險幾率大范圍降低。在本文研究中, 追蹤隨訪ELISA法檢測呈現陰性但核酸陽性者, 有8例標本HBsAg ELISA測定陰性轉化成陽性, 由此可知此血樣于ELISA窗口期予以NAT檢測時被發現的, 而且NAT測定表明有4例屬于隱匿性HBV感染患者, 說明NAT檢測對血液篩查具有重要意義[2]。
NAT檢測在應用中, 所使用的試劑必須具有較高的靈敏性、特異性, 且實驗環境具有較高要求, 和EIA檢測相對比更具有嚴格性, 在檢查中應用所需設備、試劑往往會提高血液檢測成本。而且核酸篩查存在局限性, 在病毒載量較低情況下, 通常NAT難以檢測出, 在本文研究中, 6標本予以核酸篩查呈現陽性, 但是應用核酸測定則屬于陰性, 追蹤檢測過程中發現病毒載量低于20 IU/ml[3]。
總之, NAT可以縮減“窗口期”, 減少病毒通過輸血途徑傳播風險性, 但是也會有漏檢標本出現。NAT檢測時所關注的是病毒核酸, 而ELISA檢測則為抗原或抗體, 兩者所應用的檢測原理和檢測方法均有差異性, 所以兩個方法在檢測血液標本過程中并不存在重復性, 卻有一定的互補性, 屬于血液篩查檢測重要方法。
參考文獻
[1] 何亞琴, 徐立, 楊愛龍.核酸檢測在篩查獻血者乙型肝炎病毒中的應用.中國輸血雜志, 2013, 26(3):147-148.
現在離開遵義需要核酸檢測嗎1月
目前看是不需要的,畢竟當下遵義是低風險區,不好過由于各地方的規定不一樣,所以建議大家出行前像你要到達的目的地進行咨詢。有問題的話可打目的城市公共衛生客服熱線(當地區號)-12320、抑或當地市民熱線電話(當地區號)-12345了解詳情。
遵義現在限不限制出入
遵義現在不限制出入但前提是你是低風險區的,假使你從中高風險區域到遵義,需不需要核酸檢驗和隔離,就要視遵義的防控措施而定,一般情況下,可能提供7天內核酸檢測陰性證明就可以通過,也可能要核酸檢驗還要隔離14天。假使你從低風險區去到遵義,通常能直接進入,不用核酸檢驗、隔離。建議打遵義公共衛生客服電話0852-12320、或當地市民熱線0852-12345了解詳情。
離開遵義要準備哪些
1.1檢測方法及判定規則305912份全血標本和單采血小板標本進行常規ELISA檢測。部分標本由于ELISA檢測項目不合格直接被淘汰而未進入到核酸檢測環節,有303616份標本分別進行混樣核酸檢測(191222人份)和單人份核酸檢測(112394人份)。⑴混樣核酸檢測:按照試劑盒說明書要求,篩選ELISA檢測合格標本進行8個標本混樣核酸檢測,無反應性pooling的8個標本視為該項目核酸檢測合格,有反應性pooling進行標本的拆分單檢,拆分無反應性的標本判為合格,拆分亦有反應性的標本判為該項目核酸檢測不合格。⑵單人份核酸檢測:采用單個標本核酸檢測模式,按照試劑盒和全自動核酸檢測設備要求進行檢測,檢測無反應性的標本視為HBVDNA、HCVRNA、HIV-1RNA項目聯檢合格,檢測有反應性的標本則視為HBVDNA、HCVRNA、HIV-1RNA項目聯檢不合格。
1.2統計學處理采用x²檢驗,比較各項目不合格率的差異,p<0.05為差異有統計學意義。
2結果
2.1單檢模式及混檢模式下的NAT結果303616人份標本進行核酸檢測,其中112394人份采用單人份核酸檢測系統進行檢測,檢出單獨NAT不合格數148例,不合格率為1.32‰;191222人份標本采用另外的混樣核酸檢測系統進行檢測,檢出單獨NAT不合格數63例,不合格率為0.33‰.兩者不合格率比較,有顯著性差異(P<0.05)。
2.2全血標本和單采血小板標本ELISA檢測結果305912份全血標本和單采血小板標本中,采用ELISA方法檢測全血標本278214人份,HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2三項不合格數2536例,不合格率為9.1‰;采用ELISA方法檢測單采血小板標本27698人份,HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2三項不合格數78例,不合格率為2.8‰.兩者不合格率比較,有顯著性差異(P<0.05)。
2.3全血標本和單采血小板標本NAT檢測結果NAT不合格結果包括兩類,一類為NAT反應性而ELISA無反應性,即為單獨NAT不合格結果,此類不合格的檢出即為NAT在血液篩查中所發揮的檢測效能。另一類為NAT反應性ELISA亦為反應性。303616份標本中全血標本和單采血小板標本中,276018人份全血標本的單獨NAT不合格數186例,不合格率為0.67‰;27598人份單采血小板標本的單獨NAT不合格數為26例,不合格率為0.94‰.兩者不合格率比較,無顯著性差異(P>0.05)。
3討論
確保臨床輸血的血液安全是血站工作的重心。目前,國內已有多家血站采用ELISA+NAT方法進行檢測的篩查策略。NAT技術具有高度特異性和敏感性,可以有效縮短ELISA檢測的“窗口期”,還可以避免因病毒變異、隱匿性感染等原因造成的ELISA方法的漏檢,在上世紀末,美歐日等國家血站已開展血液相關病毒核酸檢測。我國衛生和計劃生育委員會于2010年6月開始對獻血者血液進行HIV、HBV和HCV病毒核酸檢測的試點,擬定2015年國內血站全面實施核酸檢測技術。由于NAT檢測技術對實驗操作的各個環節和實驗室環境等都有很高的要求,因此NAT實驗室質量管理水平的高低直接關系到這項技術的實際應用效果。如何根據自身實驗室的情況建立適宜的檢測模式,不斷改進以提高檢測效能,既防止漏檢,又最大限度降低由于NAT假陽性而導致的血液淘汰是今后我們需要認真探討的問題[9]。本中心作為首批參評的試點單位,自2010年6月對獻血者血液常規開展NAT檢測,在此期間我們將全血標本和單采血小板標本的血液檢測模式進行了優化,將NAT檢測技術應用于不同獻血人群的血液篩查在一定程度上提高了檢測效能。
本中心自2013年1月-2014年10月間采用單檢模式進行標本的核酸檢測,NAT不合格率為1.32‰,明顯高于同期采用混樣核酸檢測系統所得到的0.33‰NAT不合格率。由于檢測系統不同、檢測模式的差異,導致其檢測靈敏度不同、檢出率也不同。對于混樣核酸檢測系統而言,pooling的方式勢必有稀釋標本的作用,其檢測靈敏度也一定低于試劑說明書所提供的檢測靈敏度。單人份核酸檢測系統的檢測靈敏度高于混樣核酸檢測系統,其檢出率也相對較高,因此,NAT檢測效能的影響因素與所采用的檢測模式、檢測靈敏度有關。在單采血小板的標本中,HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2三項ELISA檢測不合格率為2.8‰(79/27698),明顯低于同期全血標本9.1‰(2536/278214)的不合格率。由于我中心單采血小板捐獻者85%以上來自于重復獻血者,受過更多的血液安全教育,每次獻血都進行體檢和檢測,也就是通常所說的“低危獻血人群”,傳播輸血傳染病的危險性最小。而捐獻全血的重復獻血者占獻血人群比例不足50%。全血和單采血小板標本均有單獨NAT不合格檢出,不合格率分別為0.67‰(186/276018)和0.94‰(26/27598)。由于病毒感染者“窗口期”獻血,病毒變異,免疫靜默感染等原因,導致單純抗原或抗體血清學檢測不能有效保障血液安全。NAT直接檢測病毒核酸,能顯著縮短血液感染病毒的檢測“窗口期”,與ELISA方法形成互補,有效發揮其檢測效能。我國已將NAT血液篩查納入新的輸血技術操作規程。國內多家采供血機構將NAT技術應用于獻血者的血液篩查中,均有不同程度HBsAg陰性而HBVDNA的陽性檢出,從而發揮了NAT技術應有的檢測效能。
關鍵詞:生物技術;食品檢測;應用
中圖分類號:TS207.3 文獻標識碼:A
1.FTA-PCR的技術
FTAR 卡屬于特制的棉纖維卡片, 主要通過螯合劑與強力的變性劑共同浸泡,其纖維基質中包含化學物質,一旦FTAR捕捉細胞,石炭酸、EDTA以及SDS會自動地把細胞裂解,而聚丙烯酰胺會結合核酸,確保樣品中的DNA具有穩定性,同時確保核酸不會受到紫外線、核酸以及氧化劑破壞,還有利于其他微生物以及細菌生長。該種方式不僅可以直接提取DNA,而且所提取的DNA能夠于室溫下保存,給PCR檢測創造了條件。在食品檢測中,采用FTA-PCR方法,有著明顯優勢。Robert使用FTA卡來提取流感病毒RNA,聯合PCR的技術檢測流感病毒。李偉昊使用FTA卡與PCR方式相結合,提取以及檢測鮮肉中的沙門氏菌,從雞肉、豬肉、羊肉與牛肉勻漿液中實際檢出限大約70CFU/mL,能夠在六小時以內結束肉中的沙門氏菌檢測,現階段主要使用先增菌PCR的檢測方法可以節省時間12~24小時,和GB/T 4789.4-2003的方式比起來,用這種方式檢測,所用時間與檢出率效果都比較好[1]。
2.環介導的等溫擴增術(LAMP)
環介導的等溫擴增術屬于恒溫核酸的擴增方式,主要是針對基因四種特異的引物以及六個區域的設計,在常規水浴的條件下,即在65℃條件下一個小時,就能夠結束核酸擴增反應;和普通PCR比起來,無需紫外觀察、模板熱變性以及溫度循環等過程。完成擴增以后,可以按照管內的沉淀情況對結果進行評估。由于這種技術操作比較便利以及靈敏度比較高,所以廣泛應用于食品檢測中。聞偉剛[2]使用RT-LAMP技術構建了具有特異、快速以及靈敏特征的菜豆莢中斑駁病毒檢驗方式,用這種方式檢測的靈敏度比病毒的稀釋液高出3~10倍,與常規RT-PCR 檢測方式相比,靈敏度提高1000多倍。徐芊采用LAMP技術檢測水產品副溶血弧菌,只需一個小時就可以結束檢測,并且檢測限高達89CFU/g,與常規PCR的檢測方式相比,縮短將近1/2的時間。易海華研發出志賀菌LAMP檢測方式,在一個小時以內可以結束檢測,每微升檢測限高達200拷貝。LAMP 是恒溫擴增的反應之一,可以縮短普通PCR的反應升降溫耗具體時間,并且能夠通過肉眼看到檢測結果,通常在0.5~1小時內結束反應過程,所以在食品檢測中有著明顯優勢。然而由于LAMP的方式對實驗技術者與實驗環境方面有著較高要求,未達到相關要求時容易出現假陽性問題,還需要深入研究,不斷地對這種檢測技術進行完善。
3.核酸探針技術
核酸探針能夠促進單鏈核酸的配對,然后構成雙鏈,通過標記物對信號進行釋放,進而實現檢測的目的。在核酸樣品的基因序列檢測中用核酸探針檢測,由于病原體具備特異性核酸序列的片段,通過標記技術與分離手段,可以把特定片段研制為核酸探針,并用在病原體的檢測以及疾病診斷中。在病原微生物中應用核酸探針,可以鑒別高相似度基因的寄生蟲與毒株。Malic通過核酸探針的原味雜交方式,檢測與檢定球狀、銅綠假單細胞、金黃色葡萄球菌與鏈球細菌屬,經檢測得知銅綠假單胞菌侵染比較明顯,可以用于多項指標檢測。Almeida使用核酸探針原位雜交方式檢測奶粉中阪崎腸桿菌,該方式特異性高達百分之百,即便存在其他混合菌類,檢出限仍達到1CFU/10g。Almeida應用同種方式拓展樣品檢測的范圍,檢測了糞便、血液與供應水中沙門氏菌,其檢出限達到1 CFU/10g(mL),實際檢測時間在20小時以內,與常規PCR檢測方式相比,其靈敏度大大提高。曲海娜使用核酸探針方式檢測動物毛皮中耐β-內酰胺病原菌,其檢出限為529pgDNA,與傳統的藥敏實驗相比采用這種檢測方式可以降低檢測成本,將檢測周期縮短,提高食品檢測效果。鄒金峰研發出鴨圓環病毒核酸探針技術,同時用于檢測中,最低檢出量約5pgDNA,和常規PCR技術比起來,采用這種方式可以規避假陰性、假陽性發生的可能[3]。
4.基質分子的印跡技術
基質分子的印跡技術主要是應用分子印記的方式,把包含分子大小、形狀識別空洞膜印記到載體或是基質上,也就是把分子與載體印記到聚合物單體上。如2-乙烯基以及甲基的丙烯酸等,建立檢測靶與分子之間的鏈接鏈,使用電聚合、自組裝以及分子聚合和模板分子構成相應的配合物,然后添加交聯劑。例如,添加多元醇與有機二元酸交聯劑,然后在載體上構成膜,再把模板的分子包裹于膜中,然后將膜內的模板分子清除,將模板分子特異性的印記留下。因為所形成印記構造和模板分子之間互補,也就是只有印記和需檢測、分離分子形狀匹配時,這種分子才可以占據印跡的空洞。而且因為印跡三維結構中的一維屬于傳導載體,所以可以把該分子識別的過程快速、直接轉變為可識別信號。而開始基質分子的印記技術主要用于醫學臨床檢驗如肌紅蛋白檢測中,目前逐漸應用于抗生素的檢測中。Wang研制出分子的印跡技術膠質晶體類模版,能夠對蜂蜜與牛奶樣品中的金霉素、四環素、土霉素殘留進行檢測,其檢出限為0.04~0.24μmol/L。Shi把甲礬霉素作為模板,構建了層析法分子印跡的固相萃取方式,可以對河蟹中的殘留氟苯尼考胺、氯霉素、氟苯尼考與甲礬霉素進行檢測,其檢出限分別為0.03μg/kg、0.02μg/kg,0.10μg/kg、0.09μg/kg,在一天以內能夠結束全部檢測。分子的印跡技術的檢測限和色譜技術比較相似,但是其檢測的成本比色譜技術低,用該技術檢測產品時,既可以用在食品檢測中,還可以用在食品現場的自檢中,檢測范圍主要包含殺蟲劑、真菌毒素以及細菌檢測等。
5.免疫層析技術
免疫層析技術是當前興起的診斷與鑒別技術,原理是某抗原特異性的抗體容易被熒光微粒、金粒子標記,容易吸附于固相載體點樣的區域,并且同一種抗原的另一種特異性抗體會固定于固相載體另一端,一旦液體樣品浸入點樣的區域以后,已標記樣品以及特異性的抗體容易在毛細血管的作用下沿固相的載體超前移動;如果樣品之中存在待檢的抗原,待檢的抗原就會和已標記特異性的抗體結合,構成相應的復合物,復合物移至特異性的抗體區域時,抗原部分容易破壞此處特異性的抗體。
6.生物的傳感器
生物的傳感器主要是通過固定化生物活性的物質,例如生物膜、酶、DNA、蛋白質與微生物等,作為理化換能器以及敏感原件。換能器主要包括壓電晶體、氧電極、場效應管以及光敏管,同時還可以構成分析檢測的裝置,而待測的物質經過擴散作用以后,會進入分子中,對元件進行識別,在識別的作用下,和分子識別的元件進行結合,從而產生生物、化學反應。
總而言之,生物技術具有高效、經濟科學的特點,在檢測食品的過程中,應用生物檢測技術,能夠提升檢測的精度以及提高檢測的速度,是現階段食品檢測領域的新型技術,因此,食品檢測領域需要全面了解生物檢測技術,盡可能從食品的檢測細節與工作著手,在食品檢測中應用各種先進檢測技術,以確保食品檢測的安全性。
參考文獻:
[1]姜思遠,郭明英,吳艷玲.生物技術在食品生產加工與檢測中的應用[J].內蒙古石油化工,2014,21(22).
一、工作目標
嚴守養老機構疫情防控工作關口,堅決做到新入住人員人人都開展核酸檢測。
二、工作內容
(一)養老機構在接收新入住人員前,必須通知入住人員或其親屬到市疾控中心進行核酸檢測。在辦理入院手續時,養老機構必須將新入住人員24小時《核酸檢測報告(陰性)》備案到《入住人員檔案》,無報告或未放入檔案的均視為養老機構違規,嚴重的將依法予以封停。
(二)市民政局將對全市養老機構開展此項工作的情況進行督查,一旦發現未按要求,私自收住人員的,無論其是何種原因,取消以后3年的各種政策性補貼,并將該養老機構存在的問題上報至市疫情防控工作領導小組,依法依規予以封停。
三、核酸檢測地址及聯系方式
地址:市疾病預防控制中心聯系方式: