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2、管仲和鮑叔牙是一對好朋友,他們一起做過生意,一起打過仗。買賣是合伙的,鮑叔牙有錢,出的本錢就多,管仲窮,本錢出的少。可是他們賺了錢,管仲卻分的多些。鮑叔牙手下的人不服,鮑叔牙說:“管仲家里窮,我樂意多給他一份,朋友之間就應該互相幫助。”看到這里,我想起以前好朋友多拿我一點,我就不高興,不由的十分慚愧。
3、他們一起打仗時,一出兵,管仲能跑在后頭就不往前跑,而一退兵,他總是跑在最前面。別人說管仲貪生怕死,鮑叔牙又替管仲分辨:“管仲的母親老了,他是為了照顧老母親。”管仲聽后,感慨地說:“生我的是父母,了解我的只有鮑叔牙啊!”
4、是啊!為什么管仲和鮑叔牙能夠成功呢?為什么他們能受齊桓公重用呢?正是因為他們懂得“友誼”的真正意義!
[關鍵詞]骨髓間充質干細胞;角質形成細胞;創面愈合
[中圖分類號]Q813.1 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455(2013)07-0739-04
眾所周知,干細胞在創面修復中起到了重要的作用,其為創面愈合提供了各種組織細胞。業已證明,成體骨髓來源的間充質干細胞(MSCs) 具有多向分化潛能,可作為組織工程中多種種子細胞。關于MSCs分化為多種組織細胞的在體或離體實驗研究,國內外已多見報道[1-6]。但MSCs體外培養分化為上皮細胞相關報道較少,其過程中各種調控因素尚不清楚。許多實驗以及臨床現象已經證明,腎素-血管緊張素系統(RAS)對促進創面愈合起了積極重要的作用。為了探討MSCs是否能體外誘導分化為上皮細胞以及在這一過程中RAS所起的調控作用,筆者以Wistar大鼠為實驗對象,體外培養其MSCs,觀察 MSCs是否可分化為上皮細胞以及在這一過程中血管緊張素II(ANGII)所起到的調控作用。
1 材料和方法
1.1 MSCs的體外培養與鑒定:采用10~12周雄性Wistar大鼠(中山大學實驗動物中心提供),大鼠頸椎脫臼處死,無菌條件下分離雙下肢,低糖DMEM培養液從雙側脛骨及腓骨沖出骨髓,50目網篩慮過骨渣,離心棄上清液,以含體積分數10%的胎牛血清青霉素(100U/ml)和鏈霉素(100μg/ml)的DMEM/ F12培養液重懸沉淀,1×109/L密度接種,于37℃、體積分數為5%的CO2飽和濕度培養箱中培養。24h首次半量換液,以后每3 天全量換液一次。按1∶3傳代培養,接近融合的MSCs用質量濃度0.25%的胰蛋白酶(美國 Sigma公司)室溫消化30s~1min。取第3代MSCs進行實驗。取生長良好的第3代BMSCs,以2×104/ml的細胞密度接種于孔板中,分別加入成骨分化及脂向分化誘導液,觀察誘導情況。用ALP染色及油紅0染色鑒定MSCs多向分化能力。同時用流式細胞儀檢測MSCs的CD29、CD45、CD71、CD90的陽性率。
1.2 成上皮誘導:取第3代MSCs按上訴濃度接種于孔板中,用成上皮誘導液進行培養,每3天全量換液一次。成上皮誘導液配置為含體積分數10%的胎牛血清青霉素(100U/ml) 和鏈霉素(100μg/ml)的DMEM/F12培養液中加入0.5nM骨形成蛋白-4(BMP-4) (R&D Systems),0.3mM抗壞血酸,3 ng/ml人表皮生長因子。于倒置顯微鏡下觀察細胞形態的變化。
1.3 ANG II調控成上皮誘導:取第3代MSCs按上訴濃度接種于孔板中,分別設置對照組與實驗組,對照組按上述成上皮誘導方案進行誘導,實驗組在原有成上皮誘導液內加入1×10-7mol/L的ANG II。兩組細胞均培養于37℃、體積分數為5%的CO2飽和濕度培養箱中,每3天全量換各自誘導液一次。
1.4 免疫細胞化學染色:分別在對照組與實驗組細胞誘導7天及10天后,PBS洗去培養基,5%多聚甲醛固定,嚴格按照Maxim生物技術有限公司提供的免疫組化染色試劑盒說明書操作。氨基聯苯胺(DAB)顯色。角蛋白10(CKP10)多克隆抗體(Maxim)工作濃度1:100。蘇木精復染.以非特異血清代替抗作為陰性對照。角蛋白陽性細胞胞漿呈棕黃色。
1.5 流式細胞儀檢測:分別在對照組與實驗組細胞誘導3天及7天后,PBS洗去培養基,0.25%的胰蛋白酶消化后收集細。CKP10多克隆抗體(Maxim)工作濃度l:20,4℃孵育30min。PBS洗滌3次,加入異硫氰酸熒光素(FITC)標記的羊抗鼠二抗(Sigma)工作濃度l:200,4℃孵育30min。PBS洗滌3次后,流式細胞儀(BectonDickinson)檢測。
2 結果
2.1 MSCs體外培養與鑒定:原代MSCs經24h體外培養,見少量貼壁細胞。貼壁細胞前2~3天生長緩慢,以后迅速增殖,呈克隆樣生長,細胞呈較均一的梭形,7~10天匯合,細胞呈比較均一的梭形(圖1)。BMSCs 經骨向誘導后第6天呈三角形或多角形。第8天,細胞外基質分泌增多,胞漿中及胞質外可見較多黑色顆粒,胞核色淡,胞漿色深。第21天,細胞聚集成多個散在結節,中心呈黑色致密團塊狀。鈣鈷法染色檢測 ALP 活性呈陽性,胞漿內見深黑色顆粒(圖2)。MSCs 經成脂誘導后第5天可見胞漿內黃色折旋旋光性小脂滴。隨時間推移,小脂滴增多融合成大脂滴,細胞核被脂滴擠于一側。10天油紅0染色示脂滴呈紅色(圖3)。同時,第3代 BMSCs表面CD29、CD90檢測陽性,CD45、CD71檢測陰性(圖4)。
2.2 MSCs誘導為上皮細胞已經ANGII在其中的調控作用:BMSCs經成上皮誘導后3天開始,部分細胞梭形形態發生變態,圍繞細胞核成圓餅形,細胞質減少,細胞核所占細胞整體比例明顯增大,細胞核有突起,呈典型上皮樣細胞形態。誘導后7天時,兩組細胞角蛋白10(CKP10)染色均成陽性,但實驗組陽性細胞數明顯多于對照組。誘導后10天CKP10染色,該現象更為明顯(圖5)。流式細胞儀檢測,同等誘導時間下,實驗組MSCs誘導為上皮細胞誘導率明顯高于對照組(圖6)。
3 討論
創傷后,機體除調動創傷局部組織的細胞直接參與修復以恢復受損組織的完整性外,還通過動員骨髓來源的干細胞向受損組織遷移,其在創面分化為創傷修復所需細胞來促進創面愈合。MSCs來源于中胚層,具跨胚層分化潛能,Friedenstein等(1974)把骨髓來源的成纖維細胞移植到腎包膜下,可以誘導形成骨和骨髓;體內外許多實驗表明MSCs有很大的可塑性,當把MSCs移植到非放射損傷宿主,MSCs可以分化為非造血組織細胞,包括肌肉、軟 骨、骨、肝、心臟、腦、腸及肺等[7-9]。胚胎發育中存在一系列上皮-間充質轉換,原始間充質細胞始于內細胞團,是首次上皮-間充質轉換,形成新的組織器官需從間充質向上皮轉換,反之亦然。關于MSCs誘導轉化為上皮細胞的研究,國內外文獻較少報道。木有已有的研究表明,支持MSCs能在特定條件下跨胚層誘導為上皮細胞,但誘導方案五花八門,誘導效能也各有高低[10]。在本試驗中,筆者將BMP-4、抗壞血酸以及人表皮生長因子加入常規培養基中,成功將MSCs誘導為上皮細胞,誘導成功率高。這一現象,提示在創面愈合過程中,MSCs有可能可以向上皮細胞轉化,為創面修復提供修復細胞,從而促進創面愈合。
雖然現有研究均指向MSCs能誘導分化為上皮細胞,但這一過程的調控因素及機制尚不明確。而由于MSCs的易獲得性、多能性以及低免疫原性,奠定了其作為再生醫學研究的重要靶細胞,并使人們看到了其臨床應用的實際可能。因此,闡明MSCs向上皮細胞分化中的調控因素對于再生醫學的臨床轉化有著重要的意義。
腎素-血管緊張素系統(renin-angiotensin system,RAS)是調節機體功能的重要激素系統之一。它不僅在調節血壓以及水電解質平衡方面起到重要作用,而且還在心、腦、肺和血管等組織器官的損傷修復中扮演重要的角色。最近的研究發現:RAS在皮膚損傷修復與再生過程中也起到非常重要的作用[11-12],本實驗亦證明了RAS在MSCs中的存在。而ANGII作為RAS中的重要活性物質,是否對MSCs誘導為上皮細胞這一過程進行干預,引起了筆者的關注。由本實驗結果可以看出,添加ANGII組的上皮細胞轉化率明顯高于對照組,提高了誘導成功的可能性。一方面,機體內MSCs數量有限,若想獲得足夠數量的移植細胞,需經歷較長的體外擴增階段。如果在擴增階段對MSCs給予相當的誘導,能在一定程度上消除細胞分化時的不穩定性,指引其像上皮細胞分化。另一方面,在提供創面床ANGII含量,有助于已經移行至創面的MSCs高效的分化為上皮細胞,積極的參與到創面修復中來促進創面愈合。
MSCs向上皮細胞分化是一個復雜的生物學過程,可能涉及多種信號通路的調控。通過上述實驗結果,我們可以初步斷定,ANGII對MSCs向上皮細胞轉化有促進調節作用,而其調控實現機制有待于進一步的實驗來證明。相信隨著研究的進一步深入,MSCs轉化為上皮細胞從而促進創面愈合這一過程將清晰的展示在我們面前,并將為火熱的轉化醫學事業添磚加瓦。
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2009年2月10日6時許,108國道長安區官莊段發生一起交通事故,一輛貨車先后撞倒同方向騎自行車上學的5名初中學生,致4人當場死亡,1人受重傷,肇事車輛逃逸。這起重大事故給當事學生及其家庭造成巨大傷害,反映出校外存在影響學生安全的嚴重隱患。各級教育行政部門、各學校要高度重視,引以為鑒,進一步加強校園及周邊安全工作以及對學生的安全教育。
一、要扎實開展對學生的安全教育。要按照省教育廳的規定,在開學后第一周認真開展“安全教育周”活動,指導學生扎實掌握各種安全防范知識和技能,進一步增強安全防范意識,尤其是要通過安全教育防止學生經過假期以后安全意識松懈,有效提高學生對各類安全事故防范的效果。
二、要認真開展校內安全檢查和隱患整改。要在開學初開展全面的安全隱患排查,對要害部位要重點檢查,及時整改排查出的隱患,杜絕安全漏洞,落實各項安全防范措施。對學校難以解決的問題,要及時上報當地黨委、政府和有關部門,爭取支持解決。
三、要嚴格執行有關規定,合理安排學校作息制度。
四、各級教育行政部門要迅速協調有關部門,開展一次校園周邊安全隱患排查,及時發現校外影響學生安全的問題,并向當地黨委、政府和有關部門反映,協調有關部門切實解決存在問題,加強安全宣傳,改善校園周邊環境,有效防范安全事故發生。
學校被查“亂收費”被開出147萬天價罰單
“處罰147萬元,如此天價罰單讓人震驚!”2月24日上午,銅川新區藍光第校校長余志玉激動地說。近日,銅川市物價局下發《行政處罰事先告知書》,“擬沒收(該校)違法所得1476800元”。
1476800元擬被沒收
2009年春節前夕,銅川市物價局幾名工作人員來到藍光九校,出示證件及介紹信后,對該校收費項目中所涉及的價格問題進行檢查。其間,物價執法人員發現,該校初中每生每學期收費2686元,小學每生每學期收費1686元。這些收費高于物價局批準的學費及住宿費用的總和,遂要求該校進行說明,“多收的錢用哪兒了”。
余志玉說,按規定,初中學生的學費為每學期1100元,小學生每學期學費800元,住宿費為每人每學期220元,“所收費用減去學費和住宿費之后就是代辦費,由學校代替學生辦理一些具體事項的費用”。
此后,應物價局要求,校長余志玉及一名財務人員列出了一份單據,對代辦費進行了相應的解釋,稱“代辦費由伙食費,公寓管理費,水電暖費,語言、微機、電教實驗費等組成”。
銅川市物價局認為,代辦費中部分費用違反《陜西省民辦教育收費管理辦法》之規定,構成“自立項目或者自定標準收費”的價格違法行為,并先后向其下發了《責令退還書》、《行政處罰事先告知書》。在“告知書”中明確寫著“擬對你單位作出沒收違法所得1476800元的行政處罰”。
物價局認為“自立項目亂收費”
收到《行政處罰事先告知書》后,余志玉稱,“在銅川辦校多年來,從沒有違規收費”。據了解,藍光九校是藍光教育集團旗下的一所民辦學校,該集團在蒲城、富平、華縣、華陰及銅川新區等地先后辦有9所學校。藍光九校2005年在銅川開課,設有小學和初中,第一年就招生800余人,目前該校有學生1830人。
余志玉說,目前學校和物價局之間存在的主要認識差異就是“代辦費”。物價局稱,既然學校已經收取了住宿費,為什么還要收取公寓管理費?既然已經收取了學費,又為什么收取語言、微機、電教實驗費?這些費用又是誰批準收的,依據是什么?“這是很典型的重復收費,自立項目亂收費”。
余志玉稱,自己之前給物價局列的單據是“因為不知他們要這有啥用,所以沒有細想和細分,胡亂寫了幾項應付一下,誰知道這竟成了物價局執法的依據”。據他講,目前多數民辦學校都是按慣例收“代辦費”的,沒有誰細分其中的構成,也沒有人給各個部分進行定價,“這是政策的缺失”。
中的英雄林則徐曾說過:“海納百川,有容乃大,山高萬仞,無欲則剛;”雨果說過:“世界上最寬的東西是海洋比海洋海寬的是天空,比天空更廣闊的是人的胸懷。”名人們都在告訴我們寬容是人的一種美好的品質,也可以成為走向人生成功的一把鑰匙。
在春秋戰國時,有一個比較富有的人,他有一個窮朋友,有一次他找來那個窮朋友,合伙來做一個買賣,掙了一筆錢后,他卻多分給了窮朋友一些錢,別人都很不解,他卻回答:他的窮朋友上有老下有小,生活又很貧苦,所以才這樣做。這兩個人一個是鮑叔牙,一個是管仲。這兩個人后來各奔旗主,鮑叔牙選擇了公子小白,管仲選擇公子糾,管仲為了自己的主人,就在公子小白趕去繼承王位的路上放冷箭,公子小白裝被擊中,后來又乘快馬到了都城繼承了王位,公子糾黨全成為階下囚,此時的鮑叔牙不計前嫌,向公子小白舉介管仲,而后來公子小白也成為了春秋中鼎鼎大名的齊桓公,管仲更是成為了一代名相,管鮑之交的故事正是關于寬容的故事,流傳到今也不被世人所遺忘。
魏征是一代諫臣,唐太宗曾多次對魏征直言不諱而感到氣惱,但是后來唐太宗因為了解了魏征的品性,于是漸漸的寬容了他,同時魏征也提出了很好的建議,為大唐的國力強盛打下了堅實的基石。當魏征死去,唐太宗也十分的不舍,于是就寫下了“以銅為鏡可以整衣冠,以史為鏡……”其中的以史為鏡就是指魏征,這些都說明了寬容使人成功,還能雙方互利。
做人如果不寬容的話就不會得到好的還回報,在三國演義中,周瑜是一個小肚雞腸的人,他因為嫉妒和小看諸葛亮的才華,因此處處刁難諸葛亮。后來又有諸葛亮三氣周瑜,而英年早逝,周瑜為自己的一生留下了遺憾。生活中需要寬容的對待每一件事。
寬容是宰相肚里能撐船,所以在生活中我們要寬容待人,若無寬容,生命將在無限的欲望與嫉妒中而破碎,因此,讓我們珍記這把能打開成功大門的鑰匙吧!
一、語言轉換
語言轉換就是要把書面語言變成生活語言;把作品中較艱澀難懂的字眼換成相對應的明白風趣的口語,充分理解作品的意思,體會作者的情感。如講李煜的《虞美人》“春花秋月何時了,往事知多少”時,我們可抓住李煜國亡被俘后那種悔恨交加、痛不欲生、“往事只堪哀”的感情這樣講:“春天那艷麗的花兒,秋天那明亮的月兒,你們什么時候才能再次出現?看到你們,我就想起那萬萬千千的往事,真是心如刀絞,痛不欲生!”——這種完全進入人物內心深處的講述和由生活中提煉出的精美、抒情、押韻的口語,能一下子就把學生吸引住。
二、故事增趣
故事增趣就是善于在教學過程中穿插一些相關的軼聞趣事來吸引學生,增加趣味性。如教學《生于憂患,死于安樂》中“百里奚舉于市”時,可把“五張羊皮”的故事講一下。在介紹《曹劌論戰》的創作背景時,可穿插講一下“一鼓作氣”“管鮑之交”等等。生動有趣的故事可謂是提高學生課堂學習興趣屢試不爽的“靈丹妙藥”。
三、詩聯渲染
詩聯渲染就是在教學中引入一些描摹傳神、議論精辟的短詩或對聯深刻說明事理或渲染氣氛。如講諸葛亮的《出師表》時,教師開始就可先板書講解一些著名的武侯祠聯——如“兩表酬三顧,一對足千秋”“日月同懸出師表,風云常在定軍山”“義膽忠肝,六經以來二表;托孤寄命,三代而后一人”“取二川,排八陣,六出七擒,五丈原前,點四十九盞明燈,一心只為酬三顧;平西蜀,定南蠻,東和北拒,中軍帳里變金木土爻八卦,水面偏能用火攻”等,通過這些大談此表對后世的影響,以調動學生的學習興趣。還可就杜甫的《蜀相》“三顧頻煩天下計,兩朝開濟老臣心。出師未捷身先死,長使英雄淚滿襟”談諸葛亮一生的功德。通過巧用名聯、名詩襯托渲染,增加教學的魅力。
四、比照學習
比照學習就是在教學中旁征博引,把內容相似或描寫同一事物的詩文放在一起做比較學習。如在教學白居易的《錢塘湖春行》一詩時,把楊萬里的《曉出凈慈寺送林子芳》“畢竟西湖六月中,風光不與四時同。接天蓮葉無窮碧,映日荷花別樣紅”,蘇軾的《飲湖上初晴后雨》“水光瀲滟晴方好,山色空蒙雨亦奇,欲把西湖比西子,淡妝濃抹總相宜”三首詩作比較閱讀,可發現白詩是從大處落墨,著眼于西湖全景描寫;楊詩著眼某一事物表現西湖的別樣美麗;蘇詩則以古代美人之美來比喻西湖的奇麗景色,西湖不論是晴天還是雨天,就如淡妝濃抹的西施一樣,總是展現出它的美,堪稱千古絕唱。這種比照閱讀,一方面能使學生了解中華文化的博大精深,另一方面也能提高學生的審美情趣。
五、學生參與
古詩文教學也不能教師“一言堂”,唱“獨角戲”,要想方設法地調動學生參與。否則,你就是再變換語言、講故事、引詩聯、做比照,不給他們發言的機會,他們也會逐漸失去興趣。在課堂上,我們要學會節外生枝。比如在教學《為學》時,關于蜀鄙二僧的故事,貧僧去南海的經歷,課文中僅是“越明年,貧者自南海還”一句,因此我們可引導學生想象貧僧僅“一瓶一缽”如何跋山涉水、歷盡艱險到達南海的。教學《石壕吏》時,教師可在學生讀懂會背的基礎上提出問題:有人認為《石壕吏》不是一首好詩,因為詩人杜甫在這首詩中始終是一個冷漠的旁觀者,沒有勇敢地站出來。你同意這種觀點嗎?“一問激起千層浪”,課堂氣氛頓時活躍起來。學生經過討論后一致認為:偉大的詩人杜甫在《石壕吏》中是通過人物刻畫和情景描寫來表達自己的觀點的,詩人雖沒有直接站出來講話,但同情誰,憎惡誰,態度是明確的。這些問題看似節外生枝,但卻能把學生的思維引向深入,使課堂的教學出現新的。