慶祝六一的畫

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慶祝六一的畫范文第1篇

各位教師、同學(xué)們：

你們好！

今天，我們懷著喜悅的心情迎來了國際“六一”兒童節(jié)。我非常榮幸被某學(xué)校校聘請為名譽校長，與小朋友們一起共度這美好的節(jié)日。值此機會，謹(jǐn)讓我向全體小朋友、少先隊員們致以誠摯的節(jié)日問候，并向辛勤耕耘、嘔心瀝血培育祖國花朵的園丁們致以崇高的敬意！向今天即將受到表彰的先進(jìn)個人和先進(jìn)集體表示熱烈的祝賀！少先隊員、小朋友們，我們正處于一個充滿希望的挑戰(zhàn)的新時代，你們是幸運的一代，也是肩負(fù)重?fù)?dān)的一代。古人言：千里之行，始于足下。少年時代是美好人生的開端，遠(yuǎn)大的理想在這里孕育，高尚的情操在這里萌生，良好的習(xí)慣在這里養(yǎng)成，生命的輝煌在這里奠基。我真誠地希望小朋友們要珍惜美好的生活，不辜負(fù)黨和人民的殷切期望，不辜負(fù)父母的厚愛，樹立遠(yuǎn)大理想，養(yǎng)成優(yōu)良品德，培養(yǎng)過硬本領(lǐng)，歷煉健康身心，在校做一名好學(xué)生，在家做一個好孩子，在社會上做文明的小公民，從小事做起，從現(xiàn)在做起，把握正確的人生航向，用你們的行動來證明這個時代因你們而絢麗，未來的柳城將以你為榮！

青少年的健康成長離不開教師的辛勤耕耘。過去的幾年里，某學(xué)校在全體師生的努力下，堅持教育創(chuàng)新，堅持辦學(xué)特色，努力推進(jìn)素質(zhì)教育，開展了“紅領(lǐng)巾小交警中隊”、“雙休日雛鷹俱樂部”、“隊員爭星”等活動，使學(xué)生在德、智、體、美等方面得到更好的發(fā)展，成功打造教育特色品牌。當(dāng)前，面臨著深化教育改革趨勢，我希望全體領(lǐng)導(dǎo)、老師求實創(chuàng)新，與時俱進(jìn)，進(jìn)一步深入貫徹執(zhí)行黨的教育方針，促進(jìn)每一個學(xué)生的健康、和諧、全面的發(fā)展，為學(xué)生的終身學(xué)習(xí)、終身發(fā)展奠定良好的基礎(chǔ)，努力把培養(yǎng)下一代的工作做得更好！

慶祝六一的畫范文第2篇

大家好！

今天是“六一”國際兒童節(jié)，首先，我代表學(xué)校行政向同學(xué)們表示節(jié)日的祝愿！！向支持我校少先隊工作的xx單位、少先隊輔導(dǎo)員們表示崇高的敬意和誠摯的問候，同時我也代表學(xué)校行政領(lǐng)導(dǎo)祝賀新加入少先隊的少先隊員們！

少先隊員小朋友們，我們剛剛邁進(jìn)新世紀(jì)，這對于你們來說，具有非同尋常的意義，因為你們的人生歷程是與新世紀(jì)的前進(jìn)步伐緊緊相伴的，你們是新世紀(jì)的小主人！！你們是幸運的一代，也是肩負(fù)重任的一代。今天你們是天真爛漫的紅領(lǐng)巾，明天將成為建設(shè)祖國的棟梁，祖國現(xiàn)代化的實現(xiàn)要靠你們?nèi)崿F(xiàn)，中華民族的偉大復(fù)興要靠你們?nèi)^斗！要切實肩負(fù)起這樣的神圣使命，就必須把自己鍛煉成為適應(yīng)現(xiàn)代化建設(shè)需要的優(yōu)秀人才，因此，希望你們能嚴(yán)格要求自己，在家庭做一個好孩子，在學(xué)校做一個好學(xué)生，在社會做一個好公民。為長大以后推進(jìn)祖國新世紀(jì)大業(yè)做好全面準(zhǔn)備。

推進(jìn)新世紀(jì)大業(yè)，就要從小樹立遠(yuǎn)大理想。理想是人生的太陽，是催人奮進(jìn)的動力。少年有志，國家有望。不論今后你們想做什么，都要把個人的奮斗志向同國家的前途命運緊緊聯(lián)系在一起，把個人今天的成長進(jìn)步同祖國明天的繁榮昌盛緊緊聯(lián)系在一起，牢固樹立起振興中華的雄心壯志，立志為民族爭光，為祖國爭光。

推進(jìn)新世紀(jì)大業(yè)，就要從小養(yǎng)成優(yōu)良品德。這是一個人做人做事的根本。只要人人心中有國家、心中有集體、心中有他人，我們的社會就會變得更加美好。你們要繼承和發(fā)揚中華民族的傳統(tǒng)美德，從一點一滴、一言一行做起，逐步養(yǎng)成文明禮貌、團結(jié)互助，誠實首信、遵紀(jì)守法，勤儉節(jié)約，熱愛勞動的好品行，努力成為一個品德高尚得人，一個有益于社會、有益于人民的人。

推進(jìn)新世紀(jì)大業(yè)，就要從小培養(yǎng)過硬本領(lǐng)。過硬的本領(lǐng)是一個人成功的基礎(chǔ)，在科學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展、競爭日趨激烈的今天更是這樣。你們一定要以強烈的求知欲和上進(jìn)心，發(fā)奮讀書，刻苦學(xué)習(xí)各門功課，打好知識基礎(chǔ)。還要積極參加形式多樣的課外校外活動，接觸自然，了解社會，開闊眼界，增長見識，敢于創(chuàng)新，不斷提高實踐能力。

慶祝六一的畫范文第3篇

現(xiàn)在大多數(shù)人走的都太快了，我想偶爾的停留下來腳步，欣賞一下路邊的風(fēng)景，看看頭頂?shù)奈邓{(lán)天空，感受一下陽光的撫摸，或許也是很好的一種感覺。

現(xiàn)在快餐文化非常流行，很多人的工作和生活都非常忙碌，他們似乎一個星期都沒有時間去靜下心來看完一本書，所以就只想去看那些網(wǎng)絡(luò)小說，因為他們寫的比較簡潔，也適合一目十行的看下去。現(xiàn)在很多網(wǎng)絡(luò)上的文字似乎都流于表面，但是卻又抨擊人心，他們出于各種利益的角度去寫的那種消費人的情懷的文章，似乎在很大程度上對人來講并沒有很好的收獲，可是卻仍舊有很多人趨之若鶩，甘之如飴。

或許在某種程度上，我們也應(yīng)該去農(nóng)村的田野當(dāng)中走一走，去那種小路上看一看周邊的風(fēng)景，還有那種安逸的生活狀態(tài)，其實在很大程度上會讓人感覺很舒服的，至少不會帶給人太大的壓力，也不會讓人感覺生活其實是這樣悲觀而絕望的。我們總要知道，在你沒有看到的某個角落里，這個世界上一定存在著某一種思想，某一種完美主義，那是你想過的生活，也是你可以觸手可得的風(fēng)景和角落。

如果某一天你不想在你所在的大城市里生活了，想去一個遠(yuǎn)方，那個時候你不用再去追逐什么詩和遠(yuǎn)方，更不用在朋友圈里去發(fā)一大堆廢話去表達(dá)自己心目中的詩情畫意。如果想做的話你就可以大膽的走出去，讓自己去嘗試一下那些機會，卻讓自己懂得原來這些其實都并不是特別的困難。

畢竟你的行動比你的言語更加有效。

慶祝六一的畫范文第4篇

值此“六一”國際兒童節(jié)之際，我謹(jǐn)代表鎮(zhèn)黨委政府向全鎮(zhèn)小朋友們致以熱烈的節(jié)日祝賀！向全鎮(zhèn)廣大少年兒童教育工作者表示崇高的敬意和親切的問候！向青島金原建筑有限責(zé)任公司、青島華歐香茗苑有限公司等關(guān)心、支持教育事業(yè)發(fā)展的社會各界表示衷心的感謝！

去年以來，鎮(zhèn)黨委政府帶領(lǐng)全鎮(zhèn)人民，牢固樹立和落實科學(xué)發(fā)展觀，搶抓機遇，奮力趕超，干事創(chuàng)業(yè)，加快發(fā)展，經(jīng)濟和社會各項事業(yè)呈現(xiàn)出速度快、效益好、后勁足的良好局面，全鎮(zhèn)上下風(fēng)正氣順心齊，社會和諧穩(wěn)定，人民安居樂業(yè)，三個文明建設(shè)成果豐碩。鎮(zhèn)黨委政府將教育事業(yè)作為一項基礎(chǔ)工程、希望工程、民心工程，加大關(guān)心和支持力度，優(yōu)質(zhì)教育資源覆蓋面不斷擴大，教育事業(yè)有了長足發(fā)展。主要體現(xiàn)在五個方面：

一是實施免費義務(wù)教育。落實預(yù)算內(nèi)生均公用經(jīng)費的撥付和管理；全部免除義務(wù)教育階段學(xué)生雜費，對貧困家庭學(xué)生還免收課本費并提供寄宿生活費補助。

二是加快基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)。配合建設(shè)社會主義新農(nóng)村，繼續(xù)實施中小學(xué)改擴建工程，新建中心小學(xué)9間教室，新建大嶺、大陳村幼兒園，擴建后顯溝幼兒園，改建河?xùn)|、大蘆疃、麻溝河幼兒園，改造后河西小學(xué)、中心幼兒園和廒上幼兒園舊房，修繕了大嶺和許家村小學(xué)院墻。進(jìn)一步提高了農(nóng)村幼師工資待遇，為中心幼兒園配備專職衛(wèi)生保健員，學(xué)前教育和基礎(chǔ)教育辦學(xué)整體水平有了很大提高。在中學(xué)、中心小學(xué)創(chuàng)建青島市規(guī)范化學(xué)校的基礎(chǔ)上，中心幼兒園通過了青島市農(nóng)村示范園驗收，徐家洼小學(xué)被評為膠南市規(guī)范化學(xué)校，全鎮(zhèn)青島市級規(guī)范化學(xué)校達(dá)到3處，膠南市級規(guī)范化學(xué)校達(dá)到3處，膠南市示范村辦園1處。

三是全面推進(jìn)教育信息化建設(shè)。為中學(xué)、中心小學(xué)、許家村小學(xué)配備微機92臺，中學(xué)、許家村小學(xué)新上語音室，接收捐贈微機45臺。各校開齊開足信息技術(shù)課，全部學(xué)校達(dá)到市電教示范學(xué)校標(biāo)準(zhǔn)，實現(xiàn)以教育的信息化帶動教育的現(xiàn)代化。

四是進(jìn)一步提升素質(zhì)教育水平。中小學(xué)、幼兒園認(rèn)真貫徹黨的教育方針，培養(yǎng)學(xué)生德、智、體、美、勞諸方面全面發(fā)展，引領(lǐng)青少年生動活潑地健康成長，廣大中小學(xué)生成為社會主義新農(nóng)村建設(shè)的宣傳大使、文明使者，中學(xué)和中心小學(xué)分獲膠南市課外文體活動示范學(xué)校。

少年兒童是民族的未來，是我們偉大事業(yè)的希望所在。在努力培養(yǎng)教育好少年兒童上下功夫，是全黨、全社會的共同責(zé)任。各村、各單位不同程度地為教育辦了很多實事和好事，為少年兒童創(chuàng)造優(yōu)越的發(fā)展環(huán)境做出了很大努力。希望社會各方面、各界人士繼續(xù)攜起手來，切實貫徹兒童優(yōu)先原則，積極解決兒童發(fā)展中的重點、難點問題，共同營造健康和諧的少年兒童成長環(huán)境，為促進(jìn)全鎮(zhèn)教育事業(yè)發(fā)展做出新的貢獻(xiàn)。

小朋友們，今天你們是天真爛漫的紅領(lǐng)巾，明天將成為現(xiàn)代化建設(shè)的生力軍，中華民族的偉大復(fù)興最終要靠你們?nèi)^斗。你們是幸運的一代，更是肩負(fù)重任的一代。在此，殷切地希望大家從小樹立遠(yuǎn)大理想，承繼中華民族的優(yōu)秀傳統(tǒng)，做一個品德高尚的人；要從小發(fā)憤讀書，打好知識基礎(chǔ)，特別要培育創(chuàng)新精神，提高創(chuàng)造能力，做一個本領(lǐng)過硬的人；要從小鍛煉強健體魄，養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，磨煉勇敢頑強的意志，做一個身心健康的人，以實際行動來證明這個時代因你們而絢麗，未來的海青將以你們?yōu)闃s！

再次祝廣大小朋友們節(jié)日快樂！

慶祝六一的畫范文第5篇

[方法] 收集、分析本地區(qū)參加全球沙門菌監(jiān)測(GSS)腹瀉病例中分離的山夫登堡沙門菌生化、編碼SPI-1毒力島基因(hilA、invA)和耐藥特征;應(yīng)用Riboprinter(r)(RP)DNA指紋圖譜系統(tǒng)比較表型典型與不典型菌株的核糖體分型;通過Pluse Net China數(shù)據(jù)庫中同型菌株的脈沖凝膠電泳(PFGE)圖譜聚類比較分子型譜。

[結(jié)果] 2006年長寧區(qū)GSS監(jiān)測病例分離出19株山夫登堡沙門菌,其中10株屬于硫化氫陰性和SPI-1毒力島缺失的表型變異菌株。RP分型證實發(fā)生變異的山夫登堡沙門菌與典型菌株間分屬2個不同的克隆。Pluse Net China數(shù)據(jù)庫將包括長寧區(qū)19株山夫登堡沙門菌在內(nèi)的36株山夫登堡腹瀉株共分18種PFGE帶型。長寧區(qū)的表型變異株優(yōu)勢型分屬4型(2株)和6型(6株),典型菌株的優(yōu)勢型分屬11型(1株)、17型(4株)和23型(2株)。聚類分析顯示,表型變異株的克隆在遺傳相似度上高于典型株。

[結(jié)論] 分子溯源證實,SPI-1毒力島缺失的山夫登堡沙門菌變異菌株與典型菌株同樣具有引發(fā)局部爆發(fā)的致病性。2006年長寧區(qū)分離的硫化氫陰性山夫登堡沙門菌變種腹瀉株與2002年深圳市的1例食物中毒案例分離的2株SPI-1毒力島缺失株存在同源性。

關(guān)鍵詞: 山夫登堡沙門菌; 變種;Riboprinter(r)(RP); 脈沖凝膠電泳; 毒力島; 溯源

中圖分類號:R 117 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

Molecular tracing ofinfection source of rare H2S negative strains ofSalmonella Senftenberg

HUANG Zheng1, XU Xue-bin2, JIN Hui-min2, Chen Min2,RAN Lu3, KAN Biao3(1.Shangahi Municipal Changning District Center for Hygeian Analysis,Shanghai 200051,China;2. Shangahi Municipal Center of disease Control and Prevention,Shanghai 200336,China;3.China Center of Disease Control and Prevention,Beijing 100050,China)

Abstract: [Objective] To investigate the genetic clone characteristics of rare H2S negative strains of Salmonella enterica subsp. enterica serovar Senftenberg(S. Senftenberg) .

[Methods] A retrospective analysis was performed to explore the characteristics of biochemical test, encoding Salmonella pathogenecity island gene 1(SPI-1) and antibiotic resistance of S. Senftenberg from diarrhea patients in Shanghai Global Salm-Surv(GSS). Ribotyping comparisons were made between typical and atypical strains of S. Senftenberg using Riboprinter (RP) DNA finger printing technique. Using cluster analysis we compared the molecular subtyping of these strains with the same serotyping strains in China PulseNet dynamic database by PFGE.

[Results] Of 19 strains of S. Senftenberg isolated from Changningdistrict GSS-Surv hospital, there were 10 phenotype variant strains found to be H2S negative and lacking SPI-1.There were two different clones betweenvariant strains and typical strains, which was proved by RP Ribotyping. Thirty six strains of S. Senftenberg including 19 strains from Changningdistrict were divided into 18 PFGE typing-pattens by China PulseNet database. The PFGE subtype 4(2 strains) and 6(6 strains) were the predominant epidemic strains of variant strains ,the subtype 11(1 strains) ,17(4 strains)and 23(2 strains) were the predominant epidemic strains of typical strains in Changningdistrict. Cluster analysis showed the clone of variant strains was higher than that of the typical strains in genetic similarity.

[Conclusion] The molecular tracing of source confirms that variant strains of S. Senftenberg lacking SPI-1 can induce sporadic outbreak as the typical strains. There washomologous nature between H2S negative variant strains of S. Senftenbergisolated from diarrhea patients in 2006 in Changningdistrict and two strains of S. Senftenberg lacking SPI-1from a food-borne disease outbreak in 2002 in Shenzhen.

Key words: S. Senftenberg; Variant; Riboprinter(RP); PFGE; Salmonella pathogenecity island; Tracing source

長寧區(qū)疾病預(yù)防控制中心(CDC)作為上海第一批4個監(jiān)測點之一,于2006年加入非傷寒沙門菌全球監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)(GSS)。通過全市沙門菌病例監(jiān)測發(fā)現(xiàn),山夫登堡沙門菌血清型在2006年7―9月呈現(xiàn)一過性爆發(fā)的流行病學(xué)特征[1]。2006年從各哨點醫(yī)院分離到19株山夫登堡沙門菌,其中10株為硫化氫陰性株。通過表型特征分析,利用2006―2007年全市收集GSS山夫登堡沙門菌的RP核糖體分型和脈沖凝膠電泳(PFGE)分子圖譜資源,依靠國家疾病預(yù)防控制中心腸道病重點實驗室的Pluse Net China數(shù)據(jù)庫資源追溯此變異菌株的遺傳學(xué)特征,為本地區(qū)非傷寒沙門菌監(jiān)測和防制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗菌株 2006年從長寧區(qū)GSS腹瀉病例中分離19株山夫登堡沙門菌;2006―2007年上海市4個GSS監(jiān)測點分離的山夫登堡沙門菌共計39株。大腸埃希菌ATCC 25922為藥敏試驗質(zhì)控菌株;布倫登盧普沙門菌H 9812作為PFGE的分子量標(biāo)準(zhǔn)菌株,由上海市CDC菌種保藏室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 亞硒酸煌綠增菌液(SBG)、羅伯特增菌液(RVS)、木糖賴氨酸膽酸鹽瓊脂平板(XLD)、CHROMagar(tm)沙門菌顯色瓊脂平板(CAS)、M-H瓊脂平板、“H”相誘導(dǎo)軟瓊脂平板(上海科瑪嘉科技有限公司);腸道雙支糖綜合鑒別管和其他輔助生化鑒定試劑購置于上海市CDC。以上增菌液和平板均避光保存在10℃以下環(huán)境中,在有效期內(nèi)使用。

1.1.3 試劑和儀器 編碼SPI-1毒力島基因(hilA、invA)基因檢測試劑盒(上海寶生生物科技有限公司);沙門菌分型診斷血清56種(成都生物制品研究所)、沙門菌分型診斷血清79種(S&A,Ltd,泰國);藥敏分配器和14種抗生素紙片:四環(huán)素(TET)、頭孢噻呋(EFT)、阿莫西林/克拉維酸(AMC)、氨芐西林(AMP)、復(fù)方甲異惡唑(SXT)、環(huán)丙沙星(CIP)、氯霉素(C)、氧氟沙星(OFX)、萘啶酸(NA)、頭孢吡肟(FEP)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢他啶(CAZ)、慶大霉素(CN)、鏈霉素(S)(Oxoid,英國);VitekAM-60自動生化鑒定儀(生物梅里埃,法國);菌液比濁儀(西門子,德國);限制性內(nèi)切酶XbaⅠ(TaKaRa,日本);SeaKem Gold瓊脂糖(Cambraex Bio Rockland,美國);脈沖凝膠電泳儀CHEF mapper system和凝膠成像系統(tǒng)GEL Doc2000(Bio-Rad,美國);Riboprinter(r)(RP)指紋圖譜儀和酶切試劑(PvuⅡ kit)、樣品處理包(DuPont Qualicon(tm),美國)。血清和抗生素紙片均在有效期內(nèi)使用。

1.2 實驗方法

1.2.1 非傷寒沙門菌病例監(jiān)測 按照文獻(xiàn)方法[2]和《上海市沙門菌病監(jiān)測方案.2006年》中檢測程序,每月完成轄區(qū)內(nèi)3家定點臨床醫(yī)院的腸道門診糞便樣品的分離、菌株初篩鑒定和血清分型。系統(tǒng)生化反應(yīng)符合并且血清抗原式符合[3,19:g,s,t:-]者鑒定為山夫登堡沙門菌。

1.2.2 抗生素敏感性試驗 參照CLSI(NCCLS)2005年的操作規(guī)程,采用改良K-B法并根據(jù)抑菌圈直徑判斷敏感(S)、中介(I)、耐藥(R)。頭孢噻呋(EFT)K-B法的判斷結(jié)果由Oxoid公司提供參考值。

1.2.3 RP指紋圖譜分析 根據(jù)生化和基因表型的不同,選擇2006年分離的8株山夫登堡沙門菌(長寧區(qū)山夫登堡沙門菌),進(jìn)行PvuⅡ酶切圖譜的分析比較,操作步驟按照廠商提供手冊進(jìn)行。

1.2.4 PFGE數(shù)據(jù)庫 按照GSS方案要求,在中國CDC國家腸道病重點實驗室按照Pulse Net規(guī)定的PFGE標(biāo)準(zhǔn)方法,挑選包括長寧區(qū)分離的19株山夫登堡沙門菌在內(nèi)的共34株本市2006―2007年GSS分離的山夫登堡沙門菌腹瀉株進(jìn)行凝膠電泳、圖譜分析和Bio Numerics(Version 4.0)軟件聚類分析,同時將2002年深圳市從食源性爆發(fā)事件中分離的2株SPI-1毒力島缺失的山夫登堡沙門菌的PFGE圖譜重新整合后,聚類形成山夫登堡分子分型數(shù)據(jù)庫。

2 結(jié)果

2.1 長寧區(qū)19株山夫登堡沙門菌分型

表型典型菌株9株,hilA、invA基因和硫化氫均陽性;SPI-1毒力島缺失的山夫登堡不典型菌株10株,hilA、invA基因和硫化氫均陰性,涂片染色均為革蘭陰性無芽孢桿菌,系統(tǒng)生化編碼結(jié)果均提示為沙門菌屬,血清分型結(jié)果符合山夫登堡抗原式。

2.2 上海市山夫登堡沙門菌病例監(jiān)測

2006年上海市GSS山夫登堡病例在7月、8月、9月共分離30株,其中8月份高峰期14株。4個監(jiān)測點3個月內(nèi)以長寧區(qū)分離菌株最多(19/30);山夫登堡表型變異株也相對集中出現(xiàn)在7、8、9月,共11株,長寧區(qū)報告10株。2007年分離到的5株山夫登堡沙門菌沒有表型變異株報告。2年內(nèi)山夫登堡占本市非傷寒沙門菌病例血清型優(yōu)勢構(gòu)成比由2006年的第3位下降至2007年的第6位。山夫登堡沙門菌典型與不典型菌株月度報告數(shù)對應(yīng)流行曲線見圖1。

圖1 2006―2007年上海市GSS兩類山夫登堡沙門菌監(jiān)測情況

2.3 抗生素耐藥率

包括長寧區(qū)在內(nèi),2006―2007年上海市GSS共39株山夫登堡沙門菌腹瀉菌株,它們對四環(huán)素耐藥率為79.5%(31/39),對萘啶酸的耐藥率為2.6%(1/39),對其他12種抗生素均敏感。

2.4 RP指紋圖譜分析

長寧區(qū)分離的19株山夫登堡沙門菌依據(jù)硫化氫產(chǎn)生和hilA、invA基因表型分成典型與不典型株兩類。根據(jù)此原則各挑選4株(典型和不典型株)山夫登堡,同時使用PvuⅡ限制性內(nèi)切酶對菌體染色體中的核糖點進(jìn)行酶切和圖譜分析比較。圖譜顯示,表型相反的兩類菌株核糖體型的分型圖譜分別對應(yīng)為有顯著DN段差異的2個克隆群(圖2)。

注:1―SH 06163;2―SH 06124;3―SH 06142;4―SH 06100;(硫化氫+、hilA、invA基因+);5―SH 06062;6―SH 06160;7―SH 06061;8―SH 06072(硫化氫-、hilA、invA基因-);M―內(nèi)標(biāo)DNA分子量

圖2 上海市長寧區(qū)山夫登堡沙門菌核糖體分型圖譜(酶:PvuⅡ)

2.5 PFGE分型

2006―2007年上海市GSS病例的34株山夫登堡沙門菌的PFGE圖譜與2002年深圳市食源性爆發(fā)事件中分離的2株SPI-1毒力島缺失的山夫登堡沙門菌的PFGE圖譜構(gòu)建成Pluse Net China山夫登堡型譜數(shù)據(jù)庫。36株山夫登堡腹瀉株共分18種PFGE帶型。符合疑似爆發(fā)案例特征的優(yōu)勢帶型為6型(6株)、17型(5株)、23型(5株)、4型(4株)、11型(3株),其余各型均為1株。同源聚類后產(chǎn)生A、B 2個克隆族,除1株23型外,4、5、6、7型中有11株SPI-1毒力島缺失株的圖譜聚類顯示為同一克隆菌株,具有90%以上的遺傳相似性特征;而余下的12個型22株菌的電泳圖譜聚類顯示有80%的遺傳相似性,屬于更大的一組在遺傳上克隆特征相近的族特征(圖3)。長寧區(qū)分離的10株山夫登堡表型變異株間存在高度的遺傳相似性,優(yōu)勢型4型(2株)和6型(6株)僅有1個DN段的差異,并與深圳的2株組成同一個大的克隆族;另9株表型典型菌株優(yōu)勢型為11型(1株)、17型(4株)和23型(2株)。在符合爆發(fā)病例分子型特征中,長寧區(qū)曾經(jīng)爆發(fā)過由6例6型病人和4例17型病人與存在95%同源的1例18型病人分別構(gòu)成2例較典型的案例,而其他的優(yōu)勢型,包括4型、11型、23型在長寧區(qū)均屬于高度散在的“爆發(fā)”。

3 討論

GSS是重點針對非傷寒沙門菌引起“散在爆發(fā)”案例開展相關(guān)食源性溯源調(diào)查研究的全球合作項目[3]。山夫登堡是我國較常見的沙門菌血清型,在禽、畜等動物養(yǎng)殖場或屠宰場所易分離到,人群中帶菌者亦常見,一般僅引起散發(fā)的食源或醫(yī)源性個案病例,對多數(shù)抗生素敏感,出現(xiàn)爆發(fā)流行較少見。該菌高度散發(fā)的流行病學(xué)特征符合我們2002―2003年的食源性監(jiān)測資料[4,5]。但2006年7―9月報告的30株腹瀉菌株高度疑似為爆發(fā)病例,且同時伴有變異株病例的現(xiàn)象僅涉長寧(10例)和盧灣(1例)2區(qū)。對病例流行病學(xué)調(diào)查沒有發(fā)現(xiàn)共同就餐點和明確的疑似食品,有不潔飲食史(海鮮類和肉制品)是此次一過性爆發(fā)的主要危險因素之一。在全年同步進(jìn)行的對生鮮肉制品等食品進(jìn)行食源監(jiān)測中也沒有發(fā)現(xiàn)與病例菌株匹配的山夫登堡典型株與變異株。

RP核糖體分型能分辨菌株間5-50 kb的DN段。PFGE對DNA相對分子質(zhì)量的分辨率優(yōu)于前者。雖然本市34株(2006年30株和2007年的4株)山夫登堡沙門菌的PFGE共呈16種帶型,但聚類顯示,分別屬2個克隆族,與RP的分型結(jié)果存在一致性。PFGE 6型是變異株的優(yōu)勢型,17、23型是典型株的優(yōu)勢型,病例在長寧區(qū)有集聚性。推斷長寧區(qū)山夫登堡沙門菌優(yōu)勢PFGE腹瀉病例可能存在一個潛在而持續(xù)的污染源,由2個克隆族、3種優(yōu)勢分子型菌株構(gòu)成“多點爆發(fā)”,逐步擴散形成流行趨勢的腹瀉病例。

有山夫登堡沙門菌生態(tài)學(xué)監(jiān)測報道:1998―2002年,西班牙西南部地區(qū)的海岸水產(chǎn)養(yǎng)殖和加工廠的3種甲殼類貽貝在加工過程中受到了海水污染,使山夫登堡沙門菌形成生態(tài)循環(huán)能力造成持續(xù)而潛在的污染源,并隨著貽貝類產(chǎn)品消費增加引發(fā)人的感染病例增加。此外,文獻(xiàn)強調(diào)在含高鹽量(300 g/L)海水中長期“頑強”存活的山夫登堡沙門菌中有少數(shù)出現(xiàn)了菌落形態(tài)不典型等變異。

2002年9月,扈慶華等發(fā)現(xiàn)參于編碼SPI-1毒力島的hil A和inv A基因均缺失的山夫登堡沙門菌與本次發(fā)現(xiàn)的山夫登堡不典型菌株的基因型特征完全相符。通過初步建成的中國Pulse Net網(wǎng)絡(luò)將深圳的山夫登堡SPI-1缺失株的PFGE圖譜整合到此次的山夫登堡爆發(fā)病例的圖譜中重新聚類:深圳的2株山夫登堡沙門菌變異株之間存在1個DN段的差異,但和長寧區(qū)的10株變異株間聚集成同一遺傳克隆。兩者區(qū)別在于前者引起了1例局部食源性爆發(fā)案例,而后者引起較長時間的多點爆發(fā)案例。我們結(jié)合前期的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)論及文獻(xiàn)與菌型比對等間接和直接證據(jù)判斷:本市2006年發(fā)生的由2個克隆型導(dǎo)致的山夫登堡沙門菌爆發(fā)病例,可能源于南方流入的寄生有山夫登堡沙門菌并同時能在宿主內(nèi)完成生態(tài)循環(huán)和克隆變異變化的某些軟體海產(chǎn)品。本市大型水產(chǎn)品批發(fā)市場毗鄰長寧區(qū),病例的發(fā)生和消亡在某種程度上符合區(qū)域內(nèi)消費者對某種甲殼類水產(chǎn)品消費的變化規(guī)律。

大多數(shù)非傷寒沙門菌在自然界中缺少在特定宿主體內(nèi)的生命循環(huán),但如果在自然界的生存時間達(dá)1年甚至更久,就可能為其造就忍受環(huán)境變化獲得新的適應(yīng)環(huán)境的能力[7,8],由此帶來的某些菌株表型(產(chǎn)硫化氫能力)改變,客觀上降低了傳統(tǒng)分離方法的敏感性和增加了分離的“不確定度”的影響。由于此次GSS實驗室方案已經(jīng)系統(tǒng)評價并選擇沙門菌顯色培養(yǎng)基分離目的病原,避免了使用SS或XLD平板作為首選培養(yǎng)基而產(chǎn)生的“漏檢”現(xiàn)象[2]。

SPI-1毒力島參與構(gòu)建沙門菌的Ⅲ分泌系統(tǒng),其中主要由hil A和inv A基因共同參與了沙門菌致病性毒力島(SPI-1)的表達(dá),其致病基因理論是目前公認(rèn)的沙門菌“分子理論基礎(chǔ)”。所以目前國內(nèi)對沙門菌分子生物學(xué)檢測的靶基因也多選擇hilA和invA基因。本次我們發(fā)現(xiàn)的山夫登堡SPI-1毒力島缺失株的hil A、inv A基因不能被商品化的檢測試劑盒檢出。但問題是,從2002年的深圳到2006年上海市發(fā)生的更多看似散發(fā)實則爆發(fā)的病例這一事實可以認(rèn)為,這種變異株已經(jīng)在合適的生態(tài)環(huán)境中找到適宜的宿主長期繁殖存在并能依靠其他致病性毒力島(SPI-Ⅱ等)不斷引起爆發(fā)病例;同時其hil A、inv A基因缺失的表型特征也給分子生物學(xué)靶基因的調(diào)整提供科學(xué)依據(jù)[9]。

基于上述研究,我們建議:由于復(fù)雜環(huán)境催化和自身遺傳進(jìn)化等因素,增加了沙門菌的某些血清型不斷發(fā)生某種遺傳變異的概率,對有能力進(jìn)行沙門菌檢測的實驗室在實踐中需要不斷驗證沙門菌常規(guī)方法和分子生物學(xué)方法在日常監(jiān)測和應(yīng)急檢測中的效果,以滿足不斷增長的公共衛(wèi)生體制建設(shè)和疾病預(yù)防控制的技術(shù)需要。

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